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人精液细胞染色体直接制备         

人精液细胞染色体直接制备

作者:佚名 来源:本站原创 点击数: 更新时间:2005/11/7 14:54:42

        Speling~197 1年对精液细胞染色体制备技术作了首次报道,1986~Templado等改良了Sperling的方法,1988年江静等改良了Templado的方法。我们的方法如下:

    【试剂】  同外周血细胞培养及胰蛋白酶显带分析。

    【操作】  

    (1)新鲜N~2ml,经37水温箱液化30分钟,用001m0ILpH74 PBS3次,每次l 000×g离心10分钟,沉淀加0075molL KCl 5 ml3 ngm1秋水仙素O2ml37水浴1小时,750×g离心10分钟,加固定液5 m1固定2小时。离心同上,再加固定液5 mI4过夜。

    (2)离心后沉淀约O5m1,混匀,取l2滴滴在沾有冰水或干燥的玻片上,速放7580烤箱2小时,370125%新鲜胰酶处理(胰酶消化时间参考如下:有丝分裂期24秒,粗线期10秒,中期I 1秒,中期Ⅱ2)

    (3)l20 Giemsa(pH74 OOlmolL PBS配制)染色15分钟,自来水冲洗,镜检。

    【结果】

    (1)镜检各期分裂相和异常细胞。

    (2)对分散良好、形态清晰的粗线期和中期I、中期Ⅱ图象参照《人类染色体命名国际标准化》体制中的“人类男性减数分裂染色体之鉴别,进行染色体G显带核型分析。

    附:染色体显带技术一般染色体检查可诊断男性不育症,然而很多染色体异常、缺失及倒位等结构异常却很难较早地确认。 {生殖就医指南网 www.91zn.cn.是你知心的朋友} 1970年以来,CasperssonSeabrightSumner等先后发明了染色体Q显带、G显带等技术,大大提高了对染色体的鉴别率,在男性不育的染色体检测中得以广泛的应用。此外  胰蛋白酶法G显带技术(Seabright)

    【试剂】

    (1)25%胰蛋白酶:称取125g Difco胰蛋白酶,溶于500m1无菌等渗盐水中,无菌分装小瓶,冰冻保存备用。

    (2)4 gL酚红指示剂:取酚红400mg于玻璃研钵中研磨,加O1toolL NaOI-I 5 m1,再加蒸馏水100ml

    (3)Giemsa,染色液:配方同前。

    【操作】

    (1)25%胰蛋白酶用等渗盐水稀释成0025%浓度后,按50ml4 gL酚红指示剂2滴,以05molL NaOHpH68,肉眼观察呈桔黄色。

    (2)将预先制备的染色体片(75-80烘烤2小时)放入预温37的胰蛋白酶溶液中1030分钟(根据胰酶活性和涂片厚薄,每次均有差异)

    (3)取出染色体片放入预温37Giemsa染液中15分钟(50ml蒸馏水加Giemsa原液3 m1)

(4)自来水冲洗,镜下观察。先用低倍选择较好的分裂相,再用油镜观察核型或显微摄影配对核型。

文章录入:男性病    责任编辑:男性病 
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